快速病毒RNA免核酸提取

SYBR Green熒光PCR檢測(cè)試劑盒

試劑盒簡(jiǎn)介：本試劑盒中采用du特配方，能夠快速高效的裂解各種常見樣本，無需重復(fù)離心便可獲得高質(zhì)量的病毒RNA，適用于以RNA為模板的定量PCR的檢測(cè)。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞培養(yǎng)液、血液、血清中病毒RNA的提取。

試劑盒組成

保存期：-20oC 保存，保存期一年。

注意：使用前將RNA-Lysis室溫充分混勻。

準(zhǔn)備的儀器：離心機(jī)、移液器、PCR儀

使用方法

一、 樣品的處理方法

1.少量樣本處理方法

（1）吸取15μL樣本放入1.5ml離心管中。

（2）加入25 μL RNA Lysis。

（3）充分混勻,室溫靜置5分鐘，加入350µL樣品稀釋液混勻。

（4）10,000rpm離心1分鐘，取1-2μL作為PCR反應(yīng)模板。

2.大量樣本處理方法

（1）分別吸取15μL不同的樣本依次放入8聯(lián)管中。

（2）加入25 μL RNA Lysis。

（3）充分混勻,室溫靜置5分鐘，10,000rpm離心1分鐘。

（4）分別從（3）中吸取10μL處理后樣品依次加入一新的8聯(lián)管。

（5）每孔分別加入90µL樣品稀釋液混勻。取1-2μL作為熒光PCR反應(yīng)模板。

二、在RNase free 的離心管中配制PCR反應(yīng)體系(以ROCH 480 為測(cè)試機(jī)型)

三、反應(yīng)程序

     對(duì)于有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的模板，可以將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到55oC，有助于提高擴(kuò)增效率；

延伸時(shí)間請(qǐng)根據(jù)使用儀器所需要的數(shù)據(jù)采集最短時(shí)間進(jìn)行調(diào)整；

溶解曲線的設(shè)定，根據(jù)儀器的默認(rèn)采集程序設(shè)定即可。

注意事項(xiàng)

（1）在進(jìn)行大量樣品檢測(cè)時(shí)，可將本試劑盒的試劑預(yù)分裝到8聯(lián) PCR管，用多通道移液器進(jìn)行多樣本的處理。

（2）取樣的細(xì)胞量應(yīng)當(dāng)適中，濃度不宜過高或過低，處理后溶液應(yīng)當(dāng)以透明為宜。擴(kuò)增病毒基因時(shí)需要根據(jù)病毒的滴度決定取樣的細(xì)胞數(shù)量。

（3）樣品處理過程中應(yīng)當(dāng)防止交叉污染，推薦設(shè)置陰性樣品參與處理過程，以檢測(cè)環(huán)境的污染。

（4）PCR的退火溫度可根據(jù)引物的預(yù)測(cè)Tm值減去5℃，或者通過梯度PCR摸索最佳退火溫度。

（5）用本試劑盒處理的樣品可于-20℃保存 1個(gè)月。

（6）為防止試劑盒污染，請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。