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一、原理
飼料版黃曲霉B1ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中黃曲霉B1的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測飼料等樣品中黃曲霉B1的殘留。
三、飼料版黃曲霉B1ELISA檢測試劑盒特點及技術指標
* 檢 測 時 間 ： 30 min
* 試劑盒靈敏度： 0.03ppb(µg/kg)
* 樣本處理方法簡單，并與玉米赤霉烯酮前處理方法部分統一化，節省了人力物力；
* 試劑盒提供工作濃度標準品，使用更方便；
* 試劑盒檢測樣本的靈敏度和準確度：
樣本 | 檢測下限 | 回收率 |
飼料等 | 3pb | 70%-120% |
試劑盒特異性：
藥物名稱 | 交叉反應率（%） |
黃曲霉B1 | 100% |
黃曲霉G1 | < 1% |
四、所需材料
儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm、振蕩器、離心機、刻度移液管（10 mL）、洗耳球、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL
多道 50µL～300µL
試劑：甲醇、去離子水。
五、 試劑盒組成
序號 | 組成部分 | 96T裝量 |
1 | 黃曲霉B1酶標板 | 12×8孔 |
2 | 黃曲霉B1標準品濃度*5 | 0.5-1 mL |
3 | 黃曲霉B1酶標物 | 7 mL |
4 | 黃曲霉B1抗體 | 7 mL |
5 | 底物液A液 | 7 mL |
6 | 底物液B液 | 7 mL |
7 | 終 止 液 | 7 mL |
8 | 20×濃縮洗滌液 | 40 mL |
9 | 2×黃曲霉B1樣品稀釋液 | 40mL |
*注：A、B、C、D、E 5個標準品濃度為：0ppb，0.03ppb，0.09ppb，0.27ppb，0.81ppb，A、B標準品各1mL，其余各0.5mL，直接使用。
六：溶液配制
配液1: 洗滌工作液
用去離子水將20 ×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋。配好的洗滌工作液在4 ℃環境可保存一 個月，用前一天取出回溫。
配液2: 1 ×黃曲霉B1稀釋液
用去離子水將2 ×黃曲霉B1稀釋液按1:1體積比進行稀釋。配好的1 ×黃曲霉B1稀釋液在4℃環境可保存一個月，用前一天取出回溫。
配液3: 樣品提取液
將甲醇與去離子水按V甲：V水=4:1 體積比配制成80%甲醇，即樣品提取液。
七、樣本前處理
樣本處理前須知：
① 處理完的樣品應及時進行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
② 樣本數目超過8個時推薦使用排槍加樣。
全麥、全玉米、花生粕、豆粕、乳豬料、豬育肥料、牛飼料、DDGS等（稀釋倍數：100倍）
① 稱取粉碎樣品1.0 g ± 0.05 g至離心管中，加入 10 mL 樣品提取液（配液3）， 震蕩提取1 min；
② 4000 r / min離心5 min；
③ 小心移取上清液100 μL 加到300μL 1 ×黃曲霉B1稀釋液中， 混勻，取50 μL用于分析。
八、 酶標免疫測定程序
加入洗滌工作液250µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內液體，重復洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
液B液50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環境中反應10min。
九、 結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以黃曲霉B1標準品濃度（ppb）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中黃曲霉B1實際濃度。（詳見試劑盒專業分析軟件，以便進行大量樣本的分析計算。）
十、 注意事項
① 洗板拍干后應立即進行下一步操作。
② 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。
④ 0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min，反之則減短反應時間。
⑥ 未提及樣本請致電本公司技術服務部。
十一、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質 期： 12個月
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